Pecyn RNA Gwaed / Cell / Meinwe TGuide S96

A-1 lysis celloedd neu homogeneiddio ddim yn ddigonol

---- Lleihau'r defnydd o sampl, cynyddu faint o byffer lysis, cynyddu homogeneiddio ac amser lysis.

Mae swm sampl A-2 yn rhy fawr

---- Lleihau faint o sampl a ddefnyddir neu gynyddu faint o byffer lysis.

A-1 lysis neu homogeneiddio annigonol

---- Lleihau'r defnydd o sampl, cynyddu faint o byffer lysis, cynyddu homogeneiddio ac amser lysis.

Mae swm sampl A-2 yn rhy fawr

---- Cyfeiriwch at y capasiti prosesu uchaf.

Nid yw RNA A-3 yn cael ei dynnu o'r golofn yn llwyr

---- Ar ôl ychwanegu dŵr heb RNase, gadewch ef am ychydig funudau cyn centrifugio.

A-4 Ethanol yn yr elifiant

---- Ar ôl rinsio, centrifuge eto a thynnwch y byffer golchi cymaint â phosib.

A-5 Nid yw cyfrwng diwylliant celloedd yn cael ei symud yn llwyr

---- Wrth gasglu celloedd, gwnewch yn siŵr eich bod yn cael gwared ar y cyfrwng diwylliant gymaint â phosibl.

A-6 Nid yw'r celloedd sy'n cael eu storio yn RNAstore wedi'u canoli'n effeithiol

---- Mae dwysedd RNAstore yn fwy na'r cyfrwng diwylliant celloedd ar gyfartaledd; felly dylid cynyddu'r grym allgyrchol. Awgrymir centrifuge ar 3000x g.

A-7 Cynnwys RNA isel a digonedd yn y sampl

---- Defnyddiwch sampl gadarnhaol i benderfynu a yw'r cynnyrch yn achosi'r cynnyrch isel.

A-1 Nid yw'r deunydd yn ffres

---- Dylid storio meinweoedd ffres mewn nitrogen hylif ar unwaith neu ar unwaith yn yr ymweithredydd RNAstore i sicrhau'r effaith echdynnu.

Mae swm sampl A-2 yn rhy fawr

---- Lleihau swm y sampl.

A-3 RNase contamination

---- Er nad yw'r byffer a ddarperir yn y pecyn yn cynnwys RNase, mae'n hawdd halogi RNase yn ystod y broses echdynnu a dylid ei drin yn ofalus.

Llygredd electrofforesis A-4

---- Amnewid y byffer electrofforesis a sicrhau bod y nwyddau traul a'r Byffer Llwytho yn rhydd o halogiad RNase.

A-5 Gormod o lwytho ar gyfer electrofforesis

---- Lleihau faint o lwytho sampl, ni ddylai llwytho pob ffynnon fod yn fwy na 2 μg.

Mae swm sampl A-1 yn rhy fawr

---- Lleihau swm y sampl.

A-2 Mae gan rai samplau gynnwys DNA uchel a gellir eu trin â DNase.

---- Perfformio triniaeth DNase Heb RNase i'r datrysiad RNA a gafwyd, a gellir defnyddio'r RNA yn uniongyrchol ar gyfer arbrofion dilynol ar ôl triniaeth, neu gellir ei buro ymhellach gan becynnau puro RNA.

Ar gyfer nwyddau gwydr, wedi'u pobi ar 150 ° C am 4 h. Ar gyfer cynwysyddion plastig, ymgolli mewn NaOH 0.5 M am 10 munud, yna eu rinsio'n drylwyr â dŵr heb RNase ac yna ei sterileiddio i gael gwared ar RNase yn llwyr. Rhaid i'r adweithyddion neu'r toddiannau a ddefnyddir yn yr arbrawf, yn enwedig dŵr, fod yn rhydd o RNase. Defnyddiwch ddŵr heb RNase ar gyfer yr holl baratoadau ymweithredydd (ychwanegwch ddŵr i botel wydr lân, ychwanegwch DEPC i grynodiad terfynol o 0.1% (V / V), ysgwyd dros nos ac awtoclaf).