TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Puro DNA yn gyflym o amrywiol ddefnyddiau ar gyfer canfod PCR.

Mae Pecyn TIANcombi DNA Lyse & Det PCR yn mabwysiadu dyluniad pecynnu unigryw sy'n cynnwys yr holl adweithyddion ar gyfer paratoi DNA genomig cyflym ac ymhelaethu PCR. Mae'n berthnasol ar gyfer puro DNA genom un cam o amrywiol samplau (meinweoedd planhigion, hadau, meinweoedd anifeiliaid, gwaed, burum a bacteria) a'r ymhelaethu a chanfod PCR dilynol. Nid oes angen tynnu protein, RNA a metabolion eilaidd eraill, echdynnu toddyddion organig yn ogystal â'r camau dyodiad ethanol yn y broses buro gyfan, gan wneud y llawdriniaeth yn syml ac yn gyflym. Mae ansawdd y cynnyrch yn sefydlog ac yn ddibynadwy.

Mae'r MasterMix PCR 2 × Det a ddarperir gan y pecyn hwn yn adweithydd PCR cydnaws iawn a all ymhelaethu ar DNA yn effeithlon ac yn benodol heb yr angen i gael gwared ar amhureddau fel proteinau. Mae'r adweithydd hwn yn cynnwys polymeras Taq DNA, dNTPs, MgCl2, byffer, yn ogystal â'r teclyn gwella, optimizer a sefydlogwr ar gyfer adwaith PCR. Mae cymhwyso'r ymweithredydd yn gwneud adwaith PCR yn gyflym, yn syml, yn sensitif, yn benodol ac yn sefydlog. Felly, mae'r pecyn hwn yn arbennig o addas ar gyfer sgrinio trwybwn uchel.

Cath. Na Maint Pacio
4992527 20 µl × 50 rxn
4992528 20 µl × 200 rxn

 

 


Manylion y Cynnyrch

Enghraifft Arbrofol

Cwestiynau Cyffredin

Tagiau Cynnyrch

Nodweddion

■ Syml a chyflym: gellir tynnu DNA o wahanol feinweoedd mewn 5 munud heb fod angen malu nitrogen hylifol.
■ Cymwysiadau eang: Yn berthnasol ar gyfer dail planhigion, hadau, meinweoedd anifeiliaid, samplau gwaed (gwaed ffres, gwrthgeulo, ceuladau gwaed, smotiau gwaed sych, ac ati), burum a bacteria.
■ Cydnawsedd cryf: Mae'r ymweithredydd PCR yn addas ar gyfer ymhelaethu ar DNA a dynnwyd o amrywiol ffynonellau sampl.

Ceisiadau

■ Canfod genynnau: Dewis delfrydol ar gyfer canfod genynnau ar raddfa fawr.

Nodiadau Pwysig

■ Ar gyfer samplau sy'n cynnwys lefel uchel o ffenolau, fel dail cotwm, dylai'r swm mewnbwn sampl fod yn llai na 0.4 mg, fel arall bydd yr adwaith PCR yn cael ei effeithio.

Gellir addasu'r holl gynhyrchion ar gyfer ODM / OEM. Am fanylion,cliciwch Gwasanaeth Customized (ODM / OEM)


  • Blaenorol:
  • Nesaf:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Exampl Tynnwyd DNA o 5 mg o ddail a hadau corn, gwenith, reis, ffa soia a chotwm, yn y drefn honno. Ymhelaethwyd ar y DNA gan PCR gan ddefnyddio primers penodol. Llwythwyd 6 μl DNA o'r cyfanswm elifiant 20 μl fesul lôn.
    1: Genom rheolaeth gadarnhaol; 2: gadael samplau; 3: samplau hadau; 4: NTC; 5: primers D2000
    Experimental Example M: Marciwr TIANGEN D2000; 1: Rheolaeth gadarnhaol;
    2-7: Nifer y smotiau gwaed sych ar y papur hidlo yw 1-6 yn y drefn honno; 8: Rheolaeth negyddol.
    Defnyddiwyd y puncher 3 mm i gymryd y smotiau gwaed sych o'r papur hidlo fel y deunydd ar gyfer y prawf echdynnu.
    Llwythwyd 6 μl DNA o'r cyfanswm elifiant 20 μl fesul lôn.
    Experimental Exampl M: Marciwr TIANGEN D2000; 1: Rheolaeth gadarnhaol (defnyddiwyd DNA genomig fel templed); 2-7: Faint o waed sy'n cael ei ychwanegu yw 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl a 60 μl, yn y drefn honno; 8-13: Swm y gwaed a ychwanegir yw 10 μl, 20 μl, 30 μl, 40 μl, 50 μl a 60 μl, yn y drefn honno; 14: NTC.
    Llwythwyd 6 μl DNA o'r cyfanswm elifiant 20 μl ar y gel agarose.
    C: Dim bandiau ymhelaethu

    Templed A-1

    ■ Mae'r templed yn cynnwys amhureddau protein neu atalyddion Taq, ac ati. ——Creu templed DNA, cael gwared ar amhureddau protein neu dynnu DNA templed gyda chitiau puro.

    ■ Nid yw dadnatureiddio templed yn gyflawn —— Cynyddu tymheredd dadnatureiddio yn briodol ac ymestyn amser dadnatureiddio.

    Diraddio templed —— Ail-baratoi'r templed.

    Primer A-2

    ■ Ansawdd gwael primers —— Ail-syntheseiddio'r primer.

    ■ Diraddio primer ——Gwelwch y preimio crynodiad uchel yn gyfaint fach i'w cadw. Osgoi rhewi a dadmer lluosog neu cryopreserved tymor hir 4 ° C.

    ■ Dyluniad primer primers (ee hyd primer ddim yn ddigonol, dimer wedi'i ffurfio rhwng primers, ac ati) - Ailgynllunio primers (osgoi ffurfio dimer primer a strwythur eilaidd)

    A-3 Mg2+crynodiad

    ■ Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy isel —— Cynyddu Mg yn briodol2+ crynodiad: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    A-4 Tymheredd Annealing

    ■ Mae'r tymheredd anelio uchel yn effeithio ar rwymo primer a thempled. ——Gwelwch y tymheredd anelio a gwneud y gorau o'r cyflwr gyda graddiant o 2 ° C.

    A-5 Amser estyn

    ■ Amser estyn byr —— Cynyddu'r amser estyn.

    C: Anwir positif

    Ffenomena: Mae samplau negyddol hefyd yn dangos y bandiau dilyniant targed.

    A-1 Halogiad PCR

    ■ Traws-halogi dilyniant targed neu gynhyrchion ymhelaethu —— Yn anffodus i beidio â phibetio'r sampl sy'n cynnwys dilyniant targed yn y sampl negyddol na'u gollwng allan o'r tiwb centrifuge. Dylai'r adweithyddion neu'r offer gael eu hawtoclafio i gael gwared ar asidau niwcleig sy'n bodoli, a dylid pennu bodolaeth halogiad trwy arbrofion rheoli negyddol.

    Halogiad ymweithredydd ——Gwelwch yr adweithyddion a'u storio ar dymheredd isel.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy isel —— Cynyddu Mg yn briodol2+ crynodiad: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    ■ Dyluniad primer amhriodol, ac mae gan y dilyniant targed homoleg gyda'r dilyniant nad yw'n darged. —— Ail-ddylunio primers.

    C: Ymhelaethiad amhenodol

    Ffenomena: Mae'r bandiau ymhelaethu PCR yn anghyson â'r maint disgwyliedig, naill ai'n fawr neu'n fach, neu weithiau mae bandiau ymhelaethu penodol a bandiau ymhelaethu amhenodol yn digwydd.

    Primer A-1

    ■ Penodoldeb primer gwael

    —— Ail-ddylunio primer.

    ■ Mae'r crynodiad primer yn rhy uchel —— Cynyddu'r tymheredd dadnatureiddio yn raddol ac ymestyn amser dadnatureiddio.

    A-2 Mg2+ crynodiad

    ■ Yr Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy uchel —— Lleihau'r crynodiad Mg2 + yn briodol: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    A-3 Polymeras thermostadwy

    ■ Swm ensym gormodol ——Gwelwch swm ensym yn briodol ar gyfnodau o 0.5 U.

    A-4 Tymheredd Annealing

    ■ Mae'r tymheredd anelio yn rhy isel —— Cynyddu'r tymheredd anelio yn briodol neu fabwysiadu'r dull anelio dau gam

    Cylchoedd PCR A-5

    ■ Gormod o gylchoedd PCR —— Lleihau nifer y cylchoedd PCR.

    C: Bandiau patsh neu ceg y groth

    Primer A-1—— Penodoldeb penodol —— Ail-ddylunio'r primer, newid lleoliad a hyd y paent preimio i wella ei benodolrwydd; neu berfformio PCR nythu.

    Templed A-2 DNA

    —— Nid yw'r templed yn bur ——Diogelu'r templed neu dynnu DNA gyda chitiau puro.

    A-3 Mg2+ crynodiad

    ——Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy uchel —— Lleihau Mg yn briodol2+ crynodiad: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    A-4 dNTP

    ——Mae crynodiad dNTPs yn rhy uchel ——Gwella crynodiad dNTP yn briodol

    A-5 Tymheredd Annealing

    ——To tymheredd anelio isel —— Cynyddu'r tymheredd anelio yn briodol

    Beiciau A-6

    ——Do lawer o feiciau ——Gwella rhif y beic

    C: Faint o DNA templed y dylid ei ychwanegu mewn system adweithio PCR 50 μl?
    ytry
    C: Sut i ymhelaethu ar ddarnau hir?

    Y cam cyntaf yw dewis y polymeras priodol. Ni all polymeras Taq rheolaidd brawfddarllen oherwydd diffyg gweithgaredd datgladdu 3'-5 ', a bydd camgymhariad yn lleihau effeithlonrwydd estyn darnau yn fawr. Felly, ni all polymeras Taq rheolaidd ymhelaethu ar ddarnau targed sy'n fwy na 5 kb yn effeithiol. Dylid dewis Taq polymerase gydag addasiad arbennig neu polymeras ffyddlondeb uchel arall i wella effeithlonrwydd estyniad a diwallu anghenion ymhelaethu darn hir. Yn ogystal, mae ymhelaethu ar ddarnau hir hefyd yn gofyn am addasiad cyfatebol o ddyluniad primer, amser dadnatureiddio, amser estyn, pH byffer, ac ati. Fel arfer, gall preimio â 18-24 bp arwain at well cynnyrch. Er mwyn atal difrod templed, dylid lleihau'r amser dadnatureiddio ar 94 ° C i 30 eiliad neu lai y cylch, a dylai'r amser i godi tymheredd i 94 ° C cyn ymhelaethu fod yn llai nag 1 munud. Ar ben hynny, gall gosod tymheredd yr estyniad ar oddeutu 68 ° C a dylunio'r amser estyn yn ôl y gyfradd o 1 kb / min sicrhau ymhelaethiad effeithiol ar ddarnau hir.

    C: Sut i wella ffyddlondeb ymhelaethu PCR?

    Gellir lleihau cyfradd gwallau ymhelaethu PCR trwy ddefnyddio amryw o bolymerasau DNA gyda ffyddlondeb uchel. Ymhlith yr holl bolymerasau DNA Taq a ddarganfuwyd hyd yn hyn, ensym Pfu sydd â'r gyfradd wallau isaf a'r ffyddlondeb uchaf (gweler y tabl ynghlwm). Yn ogystal â dewis ensymau, gall ymchwilwyr leihau cyfradd treiglo PCR ymhellach trwy optimeiddio amodau adweithio, gan gynnwys optimeiddio cyfansoddiad byffer, crynodiad polymeras thermostable a gwneud y gorau o rif beic PCR.

    Ysgrifennwch eich neges yma a'i hanfon atom