Cymysgedd PCR 2 × HotStart Taq

Mae'r cynnyrch hwn yn cynnwys polymeras DNA HotStart Taq, dNTPs, MgCl2, byffer adweithio, teclyn gwella PCR, optimizer a sefydlogwr, gyda chrynodiad o 2 ×. Mae ganddo fanteision cyflymder ymhelaethu cyflym, symlrwydd, sensitifrwydd uchel, penodoldeb cryf, sefydlogrwydd da ac ati, a gall leihau gwallau gweithredu i'r graddau mwyaf. Mae'n addas ar gyfer adweithiau PCR penodol iawn, ac ymhelaethu ar dempledi cymhleth fel cynnwys GC uchel (> 60%) neu dempledi â strwythurau eilaidd, yn ogystal â chanfod genynnau ar raddfa fawr, ac ati.

Cath. Na Maint Pacio
4992321 1ml
4992322 5x1ml
4992316 5 × 1 ml

Manylion y Cynnyrch

Cwestiynau Cyffredin

Tagiau Cynnyrch

Uchafbwynt y Cynnyrch

Taq MasterMix un-tiwb (Ardystiad Cynnyrch Uwch-Dechnoleg Cenedlaethol)

■ Mae'r MasterMix PCR 2 × HotStart Taq wedi gwella penodoldeb a sensitifrwydd adwaith PCR a gall ymhelaethu ar dempledi cymhleth gyda chynnwys GC uchel, strwythur eilaidd ac ati. Gellir chwyddo cyn lleied â 2 gopi o'r templed targed, gan sicrhau canlyniadau arbrofol mwy cywir.

■ Mae fformiwla unigryw HotStart Taq MasterMix yn gwneud y system adweithio gyfan yn sefydlog iawn, ac ni fydd y gweithgaredd yn cael ei effeithio gan rewi-dadmer dro ar ôl tro neu storio tymor hir ar 4 ℃.

■ Gall y datrysiad cymysg PCR sefydlog ac effeithlon a baratowyd ymlaen llaw wneud y llawdriniaeth yn gyflym ac yn syml, gan leihau dwyster llafur a gwall samplu yn fawr. Mae teclyn gwella a optimizer PCR perfformiad uchel hefyd wedi'i gynnwys yn y gymysgedd, sy'n lleihau'r gofynion ar amodau PCR.

■ Mae gan y cynnyrch hwn systemau sy'n cynnwys llifynnau a heb liwiau. Gellir electrofforestio cynhyrchion MasterMix sy'n cynnwys llifynnau yn uniongyrchol ar ôl PCR, heb ychwanegu byffer llwytho.

Gellir addasu'r holl gynhyrchion ar gyfer ODM / OEM. Am fanylion,cliciwch Gwasanaeth Customized (ODM / OEM)


  • Blaenorol:
  • Nesaf:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    C: Dim bandiau ymhelaethu

    Templed A-1

    ■ Mae'r templed yn cynnwys amhureddau protein neu atalyddion Taq, ac ati. ——Creu templed DNA, cael gwared ar amhureddau protein neu dynnu DNA templed gyda chitiau puro.

    ■ Nid yw dadnatureiddio templed yn gyflawn —— Cynyddu tymheredd dadnatureiddio yn briodol ac ymestyn amser dadnatureiddio.

    Diraddio templed —— Ail-baratoi'r templed.

    Primer A-2

    ■ Ansawdd gwael primers —— Ail-syntheseiddio'r primer.

    ■ Diraddio primer ——Gwelwch y preimio crynodiad uchel yn gyfaint fach i'w cadw. Osgoi rhewi a dadmer lluosog neu cryopreserved tymor hir 4 ° C.

    ■ Dyluniad primer primers (ee hyd primer ddim yn ddigonol, dimer wedi'i ffurfio rhwng primers, ac ati) - Ailgynllunio primers (osgoi ffurfio dimer primer a strwythur eilaidd)

    A-3 Mg2+crynodiad

    ■ Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy isel —— Cynyddu Mg yn briodol2+ crynodiad: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    A-4 Tymheredd Annealing

    ■ Mae'r tymheredd anelio uchel yn effeithio ar rwymo primer a thempled. ——Gwelwch y tymheredd anelio a gwneud y gorau o'r cyflwr gyda graddiant o 2 ° C.

    A-5 Amser estyn

    ■ Amser estyn byr —— Cynyddu'r amser estyn.

    C: Anwir positif

    Ffenomena: Mae samplau negyddol hefyd yn dangos y bandiau dilyniant targed.

    A-1 Halogiad PCR

    ■ Traws-halogi dilyniant targed neu gynhyrchion ymhelaethu —— Yn anffodus i beidio â phibetio'r sampl sy'n cynnwys dilyniant targed yn y sampl negyddol na'u gollwng allan o'r tiwb centrifuge. Dylai'r adweithyddion neu'r offer gael eu hawtoclafio i gael gwared ar asidau niwcleig sy'n bodoli, a dylid pennu bodolaeth halogiad trwy arbrofion rheoli negyddol.

    Halogiad ymweithredydd ——Gwelwch yr adweithyddion a'u storio ar dymheredd isel.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy isel —— Cynyddu Mg yn briodol2+ crynodiad: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    ■ Dyluniad primer amhriodol, ac mae gan y dilyniant targed homoleg gyda'r dilyniant nad yw'n darged. —— Ail-ddylunio primers.

    C: Ymhelaethiad amhenodol

    Ffenomena: Mae'r bandiau ymhelaethu PCR yn anghyson â'r maint disgwyliedig, naill ai'n fawr neu'n fach, neu weithiau mae bandiau ymhelaethu penodol a bandiau ymhelaethu amhenodol yn digwydd.

    Primer A-1

    ■ Penodoldeb primer gwael

    —— Ail-ddylunio primer.

    ■ Mae'r crynodiad primer yn rhy uchel —— Cynyddu'r tymheredd dadnatureiddio yn raddol ac ymestyn amser dadnatureiddio.

    A-2 Mg2+ crynodiad

    ■ Yr Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy uchel —— Lleihau'r crynodiad Mg2 + yn briodol: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    A-3 Polymeras thermostadwy

    ■ Swm ensym gormodol ——Gwelwch swm ensym yn briodol ar gyfnodau o 0.5 U.

    A-4 Tymheredd Annealing

    ■ Mae'r tymheredd anelio yn rhy isel —— Cynyddu'r tymheredd anelio yn briodol neu fabwysiadu'r dull anelio dau gam

    Cylchoedd PCR A-5

    ■ Gormod o gylchoedd PCR —— Lleihau nifer y cylchoedd PCR.

    C: Bandiau patsh neu ceg y groth

    Primer A-1—— Penodoldeb penodol —— Ail-ddylunio'r primer, newid lleoliad a hyd y paent preimio i wella ei benodolrwydd; neu berfformio PCR nythu.

    Templed A-2 DNA

    —— Nid yw'r templed yn bur ——Diogelu'r templed neu dynnu DNA gyda chitiau puro.

    A-3 Mg2+ crynodiad

    ——Mg2+ mae'r crynodiad yn rhy uchel —— Lleihau Mg yn briodol2+ crynodiad: Optimeiddio'r Mg2+ crynodiad gan gyfres o adweithiau o 1 mM i 3 mM gydag egwyl o 0.5 mM i bennu'r Mg gorau posibl2+ crynodiad ar gyfer pob templed a primer.

    A-4 dNTP

    ——Mae crynodiad dNTPs yn rhy uchel ——Gwella crynodiad dNTP yn briodol

    A-5 Tymheredd Annealing

    ——To tymheredd anelio isel —— Cynyddu'r tymheredd anelio yn briodol

    Beiciau A-6

    ——Do lawer o feiciau ——Gwella rhif y beic

    C: Faint o DNA templed y dylid ei ychwanegu mewn system adweithio PCR 50 μl?
    ytry
    C: Sut i ymhelaethu ar ddarnau hir?

    Y cam cyntaf yw dewis y polymeras priodol. Ni all polymeras Taq rheolaidd brawfddarllen oherwydd diffyg gweithgaredd datgladdu 3'-5 ', a bydd camgymhariad yn lleihau effeithlonrwydd estyn darnau yn fawr. Felly, ni all polymeras Taq rheolaidd ymhelaethu ar ddarnau targed sy'n fwy na 5 kb yn effeithiol. Dylid dewis Taq polymerase gydag addasiad arbennig neu polymeras ffyddlondeb uchel arall i wella effeithlonrwydd estyniad a diwallu anghenion ymhelaethu darn hir. Yn ogystal, mae ymhelaethu ar ddarnau hir hefyd yn gofyn am addasiad cyfatebol o ddyluniad primer, amser dadnatureiddio, amser estyn, pH byffer, ac ati. Fel arfer, gall preimio â 18-24 bp arwain at well cynnyrch. Er mwyn atal difrod templed, dylid lleihau'r amser dadnatureiddio ar 94 ° C i 30 eiliad neu lai y cylch, a dylai'r amser i godi tymheredd i 94 ° C cyn ymhelaethu fod yn llai nag 1 munud. Ar ben hynny, gall gosod tymheredd yr estyniad ar oddeutu 68 ° C a dylunio'r amser estyn yn ôl y gyfradd o 1 kb / min sicrhau ymhelaethiad effeithiol ar ddarnau hir.

    C: Sut i wella ffyddlondeb ymhelaethu PCR?

    Gellir lleihau cyfradd gwallau ymhelaethu PCR trwy ddefnyddio amryw o bolymerasau DNA gyda ffyddlondeb uchel. Ymhlith yr holl bolymerasau DNA Taq a ddarganfuwyd hyd yn hyn, ensym Pfu sydd â'r gyfradd wallau isaf a'r ffyddlondeb uchaf (gweler y tabl ynghlwm). Yn ogystal â dewis ensymau, gall ymchwilwyr leihau cyfradd treiglo PCR ymhellach trwy optimeiddio amodau adweithio, gan gynnwys optimeiddio cyfansoddiad byffer, crynodiad polymeras thermostable a gwneud y gorau o rif beic PCR.

    Ysgrifennwch eich neges yma a'i hanfon atom